مدرسان شریف ۹۳
سایت علمی دانشجویان ایران
دانـلـود مقـالات آی اس آی 
از تـمامـی پـایـگـاه های آنـلایــن، بـه سـادگـی!
یادبرگ موسسه پژوهش
در حال نمایش 1 تا 8 از مجموع 8

تاپیک: مبانی PCR و کاربردهای آزمایشگاهی

  1. Top | #1

    • تــــــــــــــــازه وارد
    • تاریخ عضویت
      22-Sep-2009
    • رشته تحصیلی
      میکروبیولوژی
    • محل سکونت
      تهران
    • پست‌ها
      10
    • سپاس
      74
    • 36 تشکر در 8 پست
    • قدرت امتیاز دهی
      0
    • امتیاز
      10

    تعجب مبانی PCR و کاربردهای آزمایشگاهی

    سلام به همه برو بچه های انجمن زیست شناسی .

    خیلی وقت بود که قول داده بودم در زمینه ژنتیک یه تاپیک بزنم ولی جداد هم کم بود وقت داشتم هم یه خورده مشکلات در تهیه منابع بود . ولی بخاطر عشقی که به این کار داشتم در زمینه PCR که پیشنهاد یکی از دوستان هم بود یه تاپیک زدم . در مورد PCR باید بگم خیلی خیلی جذابه بخصوص برای کسانیکه به علم ژنتیک و بیوشیمی علاقه دارند .

    زیاد دیگه وقتتون رو نمی گیرم فقط این رو بگم که بهتر دونستم مراحل PCR رو از مقدمه و مفاهیم پایه شروع کنم و به بالا تمومش کنم تا سطح علمی تاپیک به تدریج از 0 به 100 برسه تا مطالب برای همه مفید باشه و سعی کنیم که دنبالشو بگیریم و در مورد هر قسمت بحث و تبادل نظر بکنیم .

    اینم اموزشPCR :

    مقدمه ای بر PCR ؛

    1) مقدمه :" PCR " یک دستگاه فتوکپی DNA"


    واقعاً عمل می کند ؟ " خیلی ساده است ! ، " چرا من بهش فکر نکرده بودم؟ " این افکار احتمالاً اولین سؤالاتی بود که اکثر محققان زیست شناسی مولکولی هنگام خواندن گزارش های واکنش زنجیره ای پلی مراز (Polymerase Chain Reaction) یا بطور خلاصه PCR از خود می پرسیدند . PCR از چند مادۀ سادۀ اولیه استفاده می کند، موادی که هر روزه در آزمایشگاه با آنها کار می کنیم. این مواد برای ساخت نسخه های بسیار زیاد از یک قطعه DNA خاص در داخل لوله ازمایش بکار می رود . PCR دستگاه فتوکپی DNA نامیده شده است . اگر چه PCR بنظر ساده می آید ، ولی در واقع یک فرآیند پیچیده است که مواد مختلفی در آن نقش دارند . بعضی مواد در ابتدای واکنش غلظت بسیار کمی دارند(DNA الگو ) ولی با پیشرفت واکنش غلظت آنها افزایش می یابد، ولی غلظت بعضی از آنها در طول واکنش به میزان بسیار جزئی تغییر می کند ( پرایمر و dNTP) . تغییرات دما و PH زیاد است ؛ به همین دلیل نوسانات زیادی در واکنش های دینامیک مولکولی وجود دارد . بنابراین PCR یک فرآیند بسیار پیچیده است. ولی کارآیی و انعطاف پذیری آن برای کار بر روی DNA بسیار زیاد است .
    در زمان کوتاهی پس از اختراع آن توسط Kary Mumis , PCR شناخت ما از زیست شناسی مولکولی را متحول کرده است .
    ورود PCR در تحقیقات زیست شناسی و پزشکی به مثابۀ یک "تقویت کننده" در موتور عمل کرده و سرعت پیشرفت تحقیقات بر روی ژنها و ژنومها را افزایش داده است. اکنون ما قادریم هر ژنی را از هر موجودی با PCR جدا کنیم و این روش سنگ بنای تمامی پروژه های تعیین توالی ژنوم می باشد . پس از جدا کردن یک ژن می توانیم آن را به منظور کلون کردن و یا جهش زائی تغییر دهیم و یا اینکه روشهای تشخیصی برای شناسائی جهش های آن ژن طراحی کنیم . از زمان گزارش اولیه کاربردهای عملی PCR ، نه تنها میزان کاربرد PCR برای ساخت DNA به طور چشمگیر افزایش یافته است ، بلکه تعداد مقالات منتشر شده در زمینۀ کاربردهای جدید PCR و یا روشهای مبتنی بر آن نیز افزایش تصاعدی داشته است .
    چندین کتاب و یک مجلۀ جدید منتشر شده است و محصولات و کیت های تجاری زیادی در زمینۀ تحقیقات و روشهای تشخیصی مبتنی بر PCR به بازار عرضه شده است، که بعضی از آنها در پست های بعدی مورد بررسی قرار می گیرد .

    2) تاریخچۀ PCR:

    سالها پیش در سال 1971 ، Khorana و همکارانش روشی را برای همانند سازی یک ناحیه از DNA دو رشته ای با استفاده از دو پرایمر ساخت DNA گزارش کردند که انتهای 3' پرایمر به سمت یکدیگر طراحی شده بود . ولی ایدۀ استفاده از این خاصیت به صورت چرخه های تکراری در یک واکنش تکثیر تا 12 سال بعد ارائه نشد. " گاهی یک ایدۀ خوب زمانی به ذهن شما می رسد که انتظارش را ندارید " . این جملۀ آغازین گزارش Kary Mullis ، مخترع PCR ، در مجلۀ Scientific American است. در مورد اینکه چگونه ، در هنگام رانندگی شبان در کوه های کارولینای شمالی در بهار 1983 ، ایدۀ راه اندازی PCR به ذهن وی الهام شد . اولین آزمایش های عملی PCR در شرکت Cetus انجام شد، که Mullis برای آن شرکت کار می کرد و پس از اختراع آن یکی از اصلی ترین منابع درآمد این شرکت بود تا اینکه در 1991 این شرکت امتیاز استفاده از PCR را به قیمت 300 میلیون دلار واگذار کرد، از زمانی که کاربردهای بالقوۀ PCR مشخص شده است، بدلیل مبالغ مالی زیادی که در زمینۀ حق امتیاز آن مبادله می شود، استفاده از آن در پیچ و خم مسائل تجاری گیر کرده است . PCR تحت پوشش حق امتیاز از انحصاری دو شرکت Hoffman La Roche وSystem Roche Molecular قرار دارد و این دو شرکت جهت جلوگیری از استفاده غیرمجاز این روش به شدت تلاش می کنند. حق امتیازهای ثبت شده در آمریکا با شماره های 202 – 83-4 ، 195 – 683-4 ، 159 -800 -4 ، 188- 965- 4 برای پوشش فرآیند PCR و شماره های 818-889-4-، 216-075-6 و 352 – 079-5 برای استفاده از DNA پلی مرازهای Taq و ® Ampi taq می باشد . تمامی موسسات ، از جمله سازمان های دانشگاهی و عمومی، برای دسترسی به روش PCR ، که شامل همۀ موارد و دستگاههای ترموسایکلر می شود، باید جهت گرفتن موافقت های مورد نیاز اقدام کنند . آزمایشگاه های دانشگاهی در صورت خرید مواد Gene Amp از شرکت
    Applied Bio Systems ( بخشی از مجموعۀ PE Bio Systems ) فروش DNA پلی مراز Taq می باشند؛ معنی آن این است که PCR در حال حاضر بیش از 25 شرکت مختلف مجاز به فروش DNA پلی مراز Taq می باشند ؛ معنی آن این است که PCR با استفاده از DNA پلی مراز Tag و یا دستگاه های ترموسایکلر از شرکت های غیرمجاز انجام شود. بعضی از شرکت های تجاری بدون مجوز انواع خاص DNA پلی مرازهای مقاوم به حرارت خاص خود را عرضه می کنند؛ ولی DNA پلی مرازها فقط باید برای اهداف غیر از PCR ، مثلاً تعیین توالی DNA استفاده شود . اگر شما در زمینۀ آزمایشهای PCR فعال هستید حتی به صورت طرف سوم و یا به منظور کنترل کیفیت داخلی، موظفید جهت اخذ مجوزهای اختصاصی اقدام نمائید. در برخی موارد این مجوز را می توانید از طریق خرید
    کیت های اختصاصی مجاز در زمینۀ کار خود کسب کنید. در صورتی که هیچ کیتی برای اهداف اختصاصی شما وجود ندارد، لازم است جهت مجوز اختصاصی خود تقاضا نمائید.
    چگونگی موارد مربوط به اخذ مجوز برای مواد PCR و دستگاه های ترموسایلکر در آردس اینترنتی: http: //www.pebio.com/ab/pcrli censefag/ منتشر شده است. مراحل قانون ی تا مرحلۀ صدور کمی وقت می گیرد، البته در زمان نوشتن این کتاب شرکت Promega یک اعتراض قانون ی در زمینۀ یکی از اولین حق امتیازهای مربوط به DNA پلی مراز Taq ها مطرح کرده است ، ولی هنوز شرکت Roche این حق امتیاز را حفظ کرده است. نتیجۀ نهایی این پرونده ممکن است پیامدهای جالبی را برای شرکت ها و کاربران این DNA پلیمراز به دنبال داشته باشد .


    امید وارم تا اینجاش بدردتون خورده باشه .....
    اگه انتقادی هست بگید تا در پست های بعدیم رفعشون بکنم .

    یا حق ...

    استاد آقا میری
  2. 7 کاربر از sh_fri_tnen برای پست مفید تشکر نموده اند:


  3. Top | #2

    • مدیر سابق بخش علوم پایه
    • تاریخ عضویت
      26-Mar-2009
    • رشته تحصیلی
      plant physiology
    • محل سکونت
      IRAN
    • پست‌ها
      1,351
    • سپاس
      5,551
    • 6,527 تشکر در 1,835 پست
    • قدرت امتیاز دهی
      13
    • امتیاز
      430

    پیش فرض پاسخ: مبانی PCR و کاربردهای آزمایشگاهی

    مرسي. عاليه. همين طوري ادامه بدين.
    برگشتم از بن بست
    به خیابانی که باز است
    بازِ باز
    بیا نگاه کن
    انتهایش
    به هیچ جا نمی رسد ...




    من تو را دوست دارم و تو دیگری را و دیگری دیگری را...
    و در این میان همه تنهاییم!

    ---------------

    هوایــــــــت که به ســــرم میزند
    دیگر در هیــــــچ هوایـــــــی
    نمی توانم نفس بکشـم
    عجب نفس گیر است
    هوای بی تویی

    خدایا... توی این شبا... فقط یه نگاه تو... درد رو از دلم می بره... من برای این درد خیلی ضعیفم... دریابم...

  4. 5 کاربر از elahe abi برای پست مفید تشکر نموده اند:


  5. Top | #3

    • تــــــــــــــــازه وارد
    • تاریخ عضویت
      22-Sep-2009
    • رشته تحصیلی
      میکروبیولوژی
    • محل سکونت
      تهران
    • پست‌ها
      10
    • سپاس
      74
    • 36 تشکر در 8 پست
    • قدرت امتیاز دهی
      0
    • امتیاز
      10

    پیش فرض پاسخ: مبانی PCR و کاربردهای آزمایشگاهی

    در مورد این قسمت کسی سوالی نداره ؟

    این بخش سومش :


    3) PCR حالتی از همانند سازی DNA می باشد :

    PCR با استفاده از اجزای همانند سازی طبیعی DNA ، در داخل لولۀ آزمایش DNA را تکثیر می نماید، در داخل یک سلول زنده همانند سازی ژنوم در یک فرآیند بسیار پیچیده با دخالت چند پروتئین مختلف صورت می گیرد، در ساده ترین تعریف برای مراحل هماند سازی، DNA دو رشته ای از هم باز می شود و هر رشته از مولکول اولیه به عنوان الگوی ساخت یک رشته مکمل جدید استفاده می شود. این مرحلۀ تکثیر بر توانایی نوکلئوتیدها برای جفت شدن با باز مقابل خود براساس قوانین معروف واتسون – کریک استوار است : همیشه A با T و G با C جفت می شوند . بنابراین رشتۀ الگو همیشه توالی بازی رشتۀ مقابل را تعیین می کند.
    تعداد زیادی از پروتئین ها و همچنین کاهش خطای همانند سازی (افزایش دقت) و تنظیم آن دخیل می باشند .
    PCR فقط اجزاء اولیۀ این سیستم پیچیده همانند سازی را جهت تکثیر قطعات کوچک DNA در یک لولۀ آزمایش بکار می برد . در یک سیستم بافری ساده ناحیۀ خاصی از مولکولی DNA الگو بوسیلۀ یک DNA پلی مراز تکثیر می شود و دی اکسی نوکلئوتیدها بعنوان بلوک های ساختمانی جهت رشتۀ جدید استفاده می شوند .
    پرایمرهای اولیگونوکلئوتیدی اختصاصی که بر اساس قوانین کلی جفت شدن بازها به DNA الگو متصل می شوند ناحیه مورد نظر از DNA الگو را جهت تکثیر مشخص می کنند . رشته های DNA الگو با استفاده از حرارت از هم جدا می شوند . حرارت باعث می شود که پیوندهای هیدروژنی بین جفت بازهای رشته های DNA شکسته شود که این فرایند را تقلیب (enaturation ) می نامند .
    پرایمر های اولیگونوکلئوتیدی توالی های مکمل خود را بروی DNA الگو پیدا خواهند کرد .
    ( اتصال annealing ) و نهایتا DNA پلیمراز اضافه کردن دی اکسی نوکلئوتید را بروی عامل
    3'-OH پرایمرها اغاز می نماید و مولکولهای جدید از روی هر دو رشته تشکیل میشوند . در مرحله حرارت دهی بعدی این رشته های تازه ساز مجددا از هم جدا می شوند و تمامی رشته های جدا شده ( هم رشته های اولیه و هم رشته های تازه ساز ) جایگاه های اتصال برای پرایمر ها را فراهم
    می سازند و به عنوان الگو برای ساخت رشته های DNA بعدی عمل میکنند. در این مرحله اولین رشته DNA ( در واقع محصول PCR ) بدست خواهد امد زیرا اتصال پرایمر دوم بروی رشته DNA ساخته شده در مرحله قبلی که در واقع با پرایمر اول شروع میشود باعث ایجاد محصول با طول مشخص می گردد . سپس افزایش تعداد نسخه های توالی DNA هدف به صورت تصاعدی می شود . در واقع رشته های توالی هدف در هر چرخه PCR دو برابر خواهد شد .
    یعنی در صورت کارایی 100% از هر نسخه DNA موجود در ابتدای واکنش تنها پس از 20 چرخه از PCR تعداد 10^6 نسخه محصول ساخته خواهد شد . البته کارایی واکنش هیچگاه 100% نخواهد بود و معمولا به تعداد چرخه های بیشتر اغلب 25-40 چرخه نیاز میباشد که به مقدار DNA اولیه و هدف واکنش بستگی دارد . ولی حتی تعداد بسیار کمی از مولکولهای الگو در ابتدای PCR را میتوان تا مقادیر بسیار زیاد یک میکروگرم و حتی بیشتر تکثیر کرد بیش از مقدار مورد نیاز برای بسیاری از کاربرد های PCR می باشد .
    از طرف دیگر معنی این تکثیر تصاعدی این است که اگر واکنش شما بطور اتفاقی با مقادیر بسیار کم از DNA الگو الوده شده باشد ممکن است جوابهای اشتباه بدست آورید . در مورد مهار کردن این الودگی در پست های مربوطه صحبت خواهد شد .
    آخرین ویرایش توسط sh_fri_tnen در تاریخ 2010-Jun-07 انجام شده است

  6. 6 کاربر از sh_fri_tnen برای پست مفید تشکر نموده اند:


  7. Top | #4

    • تــــــــــــــــازه وارد
    • تاریخ عضویت
      22-Sep-2009
    • رشته تحصیلی
      میکروبیولوژی
    • محل سکونت
      تهران
    • پست‌ها
      10
    • سپاس
      74
    • 36 تشکر در 8 پست
    • قدرت امتیاز دهی
      0
    • امتیاز
      10

    پیش فرض پاسخ: مبانی PCR و کاربردهای آزمایشگاهی

    بسم ا… الرحمن الرحیم

    بخش چهارم :

    4 - PCR از طریق سرد و گرم کردن کنترل میشود :

    اساس pcr استفاده از دماهای مختلف در سه مرحله واکنش ( denaturation - - اتصال annealing – طویل شدن extention ) می باشد . یک دمای بالا معمولا 94-95 درجه سانتی گراد برای جداکردن رشته های dna الگو بکار برده میشود . سپس دما جهت اتصال پرایمر ها به توالی های مکمل بر روی رشته های الگو پایین اورده میشود که این دما بستگی به پرایمر مورد استفاده دارد . نهایتا برای ساخت dna با کارایی زیاد دما در حد دمای بهینه فعالیت dna پلی مراز تنظیم می شود . جهت تکثیر dna هدف لازم است که این دما طی چندین چرخه تکرار شوند . این کار توسط ترمو سایکلر انجام میشود .

    ترمو سایکلر یک دستگاه قابل برنامه ریزی است که میتواند دما را به سرعت تغییر دهد و لوله های ازمایش را در دمای مورد نظر با مدت زمان مشخص نگهداری کند . ساخت این دستگاه های خودکار یکی از مهمترین پیشرفتها در زمینه pcr می باشد که این روش را در دسترسی همه قرار داده است . قبل ساخت ترمو سایکلر pcr با استفاده از سه حمام اب گرم انجام می شد که هر کدام در یک دمای خاص تنظیم شده بود و لوله های ازمایش در بین این حمام ها با دست جا به جا می شد .

    پیشرفت های دیگر در زمینه pcr جایگزین کردن قطعه کلینو dna پلیمراز I با dna پلیمرازهای مقاوم به حرارت از قبیل dna پلیمراز taq بود که در دماهای بالا مورد استفاده برای دینیچر dna در حین pcr غیر فعال نمیشوند .
    توانایی انجام مراحل مرحله extention در دمای بالا مزیت دیگری نیز در زمینه افزایش ویژگی pcr دارد . در دماهای پایین ( 37) دمای بهینه فعالیت کلینو پرایمر ممکن استبه دلیل افزایش خطای جفت شدن بازها به توالی های متفرقه متصل شوند .زیرا در این دما جفت بازهای جفت نشده پایدار ترند و به همین دلیلویژگی واکنش کاهش می یابد .

  8. 6 کاربر از sh_fri_tnen برای پست مفید تشکر نموده اند:


  9. Top | #5

    • مدیر سابق بخش علوم پایه
    • تاریخ عضویت
      26-Mar-2009
    • رشته تحصیلی
      plant physiology
    • محل سکونت
      IRAN
    • پست‌ها
      1,351
    • سپاس
      5,551
    • 6,527 تشکر در 1,835 پست
    • قدرت امتیاز دهی
      13
    • امتیاز
      430

    پیش فرض پاسخ: مبانی PCR و کاربردهای آزمایشگاهی

    شرح مراحل PCR:

    PCR در واقع روشی است که یک قطعه ی انتخابی DNA مثل یک ژن ،به میزان زیادی تکثیر می شود و این قطعات حاصل از PCR قابل استفاده در مهندسی ژنتیک هستند.
    PCR تقلید از سلول در همانندسازی است .
    برای این عمل به DNA الگوی دو رشته ای نیاز است که ژن یا قطعه ی مورد نظر ما (Gene of intrest) را در بر دارد. DNA الگو همراه با بافر مناسب ( مشابه محیط سلول ) برای فعالیت انزیم ها ، نمک خاصی به عنوان کوفاکتور ( مثلا mgcl2) و از همه مهمتر dNTP برای ساخت رشته ی جدید، به یک میکروتیوپ منتقل می شوند.
    اولین مرحله در PCR باز شدن دو رشته ی این DNA الگوست ( Denaturation) . در واقع در سلول این عمل در زمان همانند سازی توسط هلیکاز ها اتفاق می افتد ولی در اینجا برای این کار از حرارت استفاده می شود . دمای مورد نیاز بالاتر از 94 درجه ی سلسیوس است.

    در این دما دو رشته ی DNA باز شده و همانند سازی می تواند آغاز شود.
    برای همانند سازی به آنزیم DNA پلی مراز احتیاج می باشد. این آنزیم در سلول های انسانی در دمای 37 درجه فعال است و در دمای 94 درجه ( شرایط PCR) غیر فعال می شود ، بنابراین به یک آنزیم مقاوم به حرارت نیاز است .

    آنزیم Taq پلی مراز که به یک باکتری مقاوم به حرارت متعلق است ، معمول ترین آنزیمی است که در PCR به کار می رود. البته این آنزیم قدرت برگشت و تصحیح اشتباه خود را ندارد بنابراین احتمال خطا در همانندسازی زیاد است و در کارهای حساس مثل ساخت یک ژن به کار نمی رود و بیشتر برای تشخیص بیماری ها کاربرد دارد.
    آنزیم دیگری به نام pfu نیز یک DNA پلیمراز مقاوم به حرارت است و نیز قدرت تصحیح اشتباه را دارد و از این آنزیم برای کارهای حساس استفاده می توان کرد.

    ادامه دارد...
    برگشتم از بن بست
    به خیابانی که باز است
    بازِ باز
    بیا نگاه کن
    انتهایش
    به هیچ جا نمی رسد ...




    من تو را دوست دارم و تو دیگری را و دیگری دیگری را...
    و در این میان همه تنهاییم!

    ---------------

    هوایــــــــت که به ســــرم میزند
    دیگر در هیــــــچ هوایـــــــی
    نمی توانم نفس بکشـم
    عجب نفس گیر است
    هوای بی تویی

    خدایا... توی این شبا... فقط یه نگاه تو... درد رو از دلم می بره... من برای این درد خیلی ضعیفم... دریابم...

  10. 4 کاربر از elahe abi برای پست مفید تشکر نموده اند:


  11. Top | #6

    • مدیر سابق تالار زیست شناسی
    • تاریخ عضویت
      23-Mar-2010
    • رشته تحصیلی
      بیوشیمی
    • محل سکونت
      ایران
    • پست‌ها
      361
    • سپاس
      1,642
    • 1,121 تشکر در 376 پست
    • قدرت امتیاز دهی
      5
    • امتیاز
      96

    پیش فرض پاسخ: مبانی PCR و کاربردهای آزمایشگاهی

    با تشکر از همه دوستان
    منم در مورد PCR تحقیق داشتم، به ا ستاد ارئه دادم،حالا هم تحقیق و دارم نمیذارم چون خیلی زیاده. اگر کسی خواست بهم بگه میدم بهش. خوشحال میشم بتونم کمکش کنم.

  12. 3 کاربر از kany برای پست مفید تشکر نموده اند:


  13. Top | #7

    • دوســـــت جـــــــدید
    • تاریخ عضویت
      03-Nov-2010
    • رشته تحصیلی
      علوم آزمایشگاهی
    • محل سکونت
      آذربایجان غربی
    • پست‌ها
      54
    • سپاس
      319
    • 201 تشکر در 56 پست
    • قدرت امتیاز دهی
      4
    • امتیاز
      48

    پیش فرض پاسخ: مبانی PCR و کاربردهای آزمایشگاهی

    نقل قول ارسالی توسط kany مشاهده پست
    با تشکر از همه دوستان
    منم در مورد PCR تحقیق داشتم، به ا ستاد ارئه دادم،حالا هم تحقیق و دارم نمیذارم چون خیلی زیاده. اگر کسی خواست بهم بگه میدم بهش. خوشحال میشم بتونم کمکش کنم.
    من دوست دارم بخونمش میشه بدین؟؟؟اگه جوابتون مثبت بود من آدرس ایمیلمو بهتون بدم.

  14. 2 کاربر از Ela.l برای پست مفید تشکر نموده اند:


  15. Top | #8

    • مدیر سابق تالار زیست شناسی
    • تاریخ عضویت
      23-Mar-2010
    • رشته تحصیلی
      بیوشیمی
    • محل سکونت
      ایران
    • پست‌ها
      361
    • سپاس
      1,642
    • 1,121 تشکر در 376 پست
    • قدرت امتیاز دهی
      5
    • امتیاز
      96

    پیش فرض پاسخ: مبانی PCR و کاربردهای آزمایشگاهی

    نقل قول ارسالی توسط Ela.l مشاهده پست
    من دوست دارم بخونمش میشه بدین؟؟؟اگه جوابتون مثبت بود من آدرس ایمیلمو بهتون بدم.
    چرا که نشه دوست عزیز.
    دوستانی که مایلند میتونن ایمیل شونو برام بذارن (پیام خصوصی یا عمومی)که براشون میل کنم.
    حالا فکر نکنید تحقیق زیاد جالبیه
    در هر حال در خدمتم
    پایان هر رفتنی رسیدن نیست، اما برای رسیدن چاره ای جز رفتن نیست


  16. 2 کاربر از kany برای پست مفید تشکر نموده اند:


اطلاعات تاپیک

کاربران حاضر در این تاپیک

در حال حاضر 1 کاربر در حال مشاهده این تاپیک هستند. (0 عضو و 1 مهمان)

این مطلب را به اشتراک بگذارید

قوانین ارسال

  • شما نمی‌توانید تاپیک جدید ارسال کنید.
  • شما قادر به ارسال پاسخ نیستید .
  • شما نمی‌توانید فایل ارسال کنید.
  • شما نمی‌توانید پست ‌های خود را ویرایش کنید.
  •  
دانشجو در شبکه های اجتماعی
افتخارات دانشجو
لینک ها
   
سایت برگزیده مردمی در چهارمین و پنجمین جشنواره وب ایران
سایت برگزیده مردمی در چهارمین و پنجمین جشنواره وب ایران
به دانشجو امتیاز دهید:

آپلود مستقیم عکس در آپلودسنتر عکس دانشجو

توجه داشته باشید که عکس ها فقط در سایت دانشجو قابل نمایش می باشند.

Search Engine Friendly URLs by vBSEO 3.6.1